Πώς επιλέγετε τους κλώνους;

2024 Συγγραφέας: Stanley Ellington | [email protected]. Τελευταία τροποποίηση: 2023-12-16 00:15

Πότε επιλέγοντας ένα κλώνος , βεβαιωθείτε ότι οι ρίζες είναι δυνατές, λευκές και προεξέχουν ανυπόμονα από το μέσο ανάπτυξης. Εάν οι ρίζες είναι καστανές και συρρικνώνονται, ή αλλιώς φαίνονται ανενεργές, βάλτε το πίσω και ψάξτε για καλύτερο.

Εξάλλου, πώς μπορείς να κλωνοποιήσεις ένα μόνο κύτταρο;

1. Μετρήστε τα κύτταρα για να βάλετε ~16.000 κύτταρα στο πρώτο φρεάτιο (A1) μιας πλάκας 96 φρεατίων που περιέχει 200 μL μέσου.
2. Αφαιρέστε 100 µL από τα κύτταρα που περιέχουν Α1 και ανακατέψτε µε το Β1, µε πιπέτα πάνω και κάτω 3 φορές για να αναµειχθούν καλά πριν αφαιρέσετε 100 µL και ανακατέψετε µε C1 κ.λπ.

Επίσης, πώς επιλέγετε μια αποικία κυττάρων θηλαστικών; Τοποθετήστε το πιάτο κάτω από το μικροσκόπιο για να επιλέξετε αδιαφοροποίητο υγιές αποικίες . Διαλέξτε αποικίες χρησιμοποιώντας μια πιπέτα P-20 σε 10 ul. Προσεκτικά διαλέγω ένα αποικία χωρίς να διαλύσει το αποικία σε single κύτταρα και το μεταφέρουμε σε ένα πιάτο 96 φρεατίων με θρυψίνη. Κάντε πιπέτα πάνω-κάτω μερικές φορές για να διασκορπίσετε το αποικία.

Αντίστοιχα, πώς χρησιμοποιείς έναν κύλινδρο κλώνου;

Χρησιμοποιώντας στείρα μεσαία λαβίδα, σηκώστε α κύλινδρος κλωνοποίησης . Πιέστε απαλά το επίπεδο κάτω μέρος του κύλινδρος στο λείο γράσο σιλικόνης και αφαιρέστε με μια απότομη κάθετη κίνηση. Εάν γίνει σωστά, αυτό θα δώσει ομοιόμορφη κατανομή του λίπους στο κάτω μέρος του κύλινδρος . Ρυθμίστε το κύλινδρος πάνω από μια αποικία.

Πώς επιλέγετε αποικίες για σταθερές κυτταρικές σειρές;

Το πρωτόκολλο για τη δημιουργία σταθερών κυτταρικών γραμμών απαιτεί διάφορα βήματα όπως φαίνεται παρακάτω:

1. Δημιουργήστε μια καμπύλη θανάτωσης για να προσδιορίσετε τη βέλτιστη συγκέντρωση αντιβιοτικού επιλογής.
2. Επιμολύνετε κύτταρα με το επιθυμητό πλασμιδικό κατασκεύασμα
3. Επιλέξτε και επεκτείνετε σταθερές πολυκλωνικές αποικίες.
4. Προσδιορίστε μεμονωμένους κλώνους με περιορισμένη αραίωση και διαστολή.