Γιατί είναι απαραίτητος ο καθαρισμός των προϊόντων PCR πριν από τον προσδιορισμό της αλληλουχίας;

2024 Συγγραφέας: Stanley Ellington | [email protected]. Τελευταία τροποποίηση: 2023-12-16 00:15

Επαλήθευση του επιθυμητού προϊόν είναι ουσιώδης , το οποίο περιλαμβάνει επιβεβαίωση έλλειψης μη ειδικών προϊόντα και διμερή ασταριού. ΚΑΘΑΡΗ -πάνω του μίγματος αντίδρασης είναι επίσης απαραίτητη για την αφαίρεση μη ενσωματωμένων εκκινητών και dNTP που μπορεί να παρεμβαίνουν σε επακόλουθες αντιδράσεις και να οδηγήσουν σε μια μη αναγνώσιμη αλληλουχία.

Εξάλλου, γιατί είναι απαραίτητος ο καθαρισμός των προϊόντων PCR;

Πρέπει να καθαρίστε τα προϊόντα PCR να απαλλαγούμε από τα αχρησιμοποίητα εκκινητές, τα νουκλεοτίδια και τα ένζυμα προκειμένου να βελτιστοποιηθεί η επιτυχία της απολίνωσης, η οποία θα διατηρήσει και θα ακολουθήσει προϊόν του PCR . Προς το καθαρίζω ο Προϊόντα PCR , χρησιμοποιείται χρωματογραφία αποκλεισμού μεγέθους.

Κάποιος μπορεί επίσης να ρωτήσει, πρέπει να καθαρίσετε τα προϊόντα PCR πριν από την πέψη με περιοριστική ενδονουκλεάση; Η πλειονότητα των περιορισμός τα ένζυμα είναι ενεργά σε PCR buffers. Για εφαρμογές κλωνοποίησης, κάθαρση του Προϊόντα PCR πριν από την πέψη είναι απαραίτητη για την απομάκρυνση της δραστικής θερμόφιλης DNA πολυμεράσης που υπάρχει στο PCR μίγμα. Οι DNA πολυμεράσες μπορεί να αλλάξουν τα άκρα του διασπασμένου DNA και να μειώσουν την απόδοση της απολίνωσης.

Οι άνθρωποι ρωτούν επίσης, πώς προετοιμάζετε τα προϊόντα PCR για αλληλούχιση;

Απευθείας Αλληλουχία Προϊόντων PCR

1. Βεβαιωθείτε ότι έχετε ενισχύσει το σωστό τμήμα.
2. Πρέπει να αφαιρέσετε όλους τους υπολειπόμενους εκκινητές PCR και τα μη ενσωματωμένα νουκλεοτίδια.
3. Εάν οι εκκινητές PCR θα είναι επίσης οι εκκινητές προσδιορισμού αλληλουχίας, βεβαιωθείτε ότι ταιριάζουν με τις συνθήκες μας.
4. Μην υπερ-συγκεντρώνετε το δείγμα!

Μπορείτε να ακολουθήσετε το προϊόν PCR;

Απευθείας Αλληλουχία του Προϊόντα PCR . Αλληλουχία μόνο χρήσεις ένας αστάρι αντί για τα δύο που χρησιμοποιούνται σε PCR . Εάν το κάνετε μην αφαιρείτε και τα δύο αστάρια, εσύ θα πάρε δύο ακολουθίες επάλληλα μεταξύ τους που δεν είναι ευανάγνωστα. Είναι εντάξει να χρησιμοποιήσετε α PCR αστάρι για αλληλουχία αρκεί να ανταποκρίνεται στις συνθήκες μας.