Ποιος είναι ο σκοπός της χρήσης ddNTP;
Ποιος είναι ο σκοπός της χρήσης ddNTP;

Βίντεο: Ποιος είναι ο σκοπός της χρήσης ddNTP;

Βίντεο: Ποιος είναι ο σκοπός της χρήσης ddNTP;
Βίντεο: Deoxynucleotide dNTP vs Dideoxynucleotid ddNTP 2024, Νοέμβριος
Anonim

DdNTP αναφέρεται σε Διδεοξυνουκλεοτίδια τριφωσφορικά που χρησιμοποιούνται στη διδεοξυ μέθοδο Sanger για την παραγωγή διαφορετικών μηκών κλώνων DNA για προσδιορισμό αλληλουχίας DNA. Αυτό έχει ως αποτέλεσμα τον τερματισμό της διαδικασίας πολυμερισμού DNA (ή επιμήκυνσης DNA) επειδή αυτή η διαδικασία χρειάζεται μια ομάδα 3'-ΟΗ για να συνεχιστεί.

Επομένως, γιατί χρησιμοποιούνται τα ddNTP στην αλληλουχία;

Διδεοξυνουκλεοτίδια είναι αναστολείς επιμήκυνσης της αλυσίδας της DNA πολυμεράσης, μεταχειρισμένος στη μέθοδο Sanger για το DNA αλληλουχία . Τα διδεοξυριβονουκλεοτίδια δεν έχουν 3' υδροξυλομάδα, επομένως δεν μπορεί να συμβεί περαιτέρω επιμήκυνση της αλυσίδας όταν αυτό το διδεοξυνουκλεοτίδιο βρίσκεται στην αλυσίδα. Αυτό μπορεί να οδηγήσει στον τερματισμό του DNA αλληλουχία.

Ομοίως, τα ddNTP συνδέονται με τα dNTP; Ένα ή περισσότερα από τα dNTP είναι ραδιενεργά επισημασμένες για να βοηθήσουν στην οπτικοποίηση των προϊόντων αναπαραγωγής. Τέλος, κάθε σωλήνας λαμβάνει ένα από τα τέσσερα ειδικά νουκλεοτίδια που ονομάζονται διδεοξυνουκλεοτίδια ( ddNTP ). Ωστόσο, μόλις ενσωματωθεί, η DNA πολυμεράση δεν μπορεί να επεκτείνει περαιτέρω την αλυσίδα επειδή χρειάζεται ένα 3'-ΟΗ για να συνδέω στο επόμενο νουκλεοτίδιο.

Ομοίως, μπορεί κανείς να αναρωτηθεί, πώς τα ddNTP σταματούν μια αντίδραση αλληλουχίας;

Όταν υπάρχει σε μικρές ποσότητες σε αντιδράσεις αλληλουχίας , τριφωσφορικοί διδεοξυριβονουκλεοζίτες ( ddNTP ) τερματίσει το αντίδραση αλληλουχίας σε διαφορετικές θέσεις στους αναπτυσσόμενους κλώνους DNA. Τα ddNTP σταματούν μια αντίδραση αλληλουχίας επειδή: προκαλούν την πτώση της DNA πολυμεράσης από τον κλώνο του εκμαγείου. ντο.

Ποια τεχνική που περιλαμβάνει διδεοξυνουκλεοτίδια θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί;

Η αλληλουχία Sanger είναι α μέθοδος του προσδιορισμού αλληλουχίας DNA με βάση την επιλεκτική ενσωμάτωση του τερματισμού της αλυσίδας διδεοξυνουκλεοτίδια με πολυμεράση DNA κατά την in vitro αντιγραφή του DNA. Αναπτύχθηκε από τον Frederick Sanger και τους συνεργάτες του το 1977 και ήταν το πιο ευρέως διαδεδομένο μεταχειρισμένος αλληλουχία μέθοδος για περίπου 40 χρόνια.

Συνιστάται: