Βίντεο: Πώς χρησιμοποιούνται τα περιοριστικά ένζυμα κατά την εκτέλεση ηλεκτροφόρησης γέλης;
2024 Συγγραφέας: Stanley Ellington | [email protected]. Τελευταία τροποποίηση: 2023-12-16 00:15
1 Απάντηση. Για να κόψετε DNA, RNA ή πλασμίδιο στο περιορισμός τοποθεσίες (όπως EcoRI, BamHI, hindIII και BglII) για τη δημιουργία μικρότερων γενετικών θραυσμάτων που μπορούν να διαχωριστούν και έτσι να χαρακτηριστούν χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση γέλης.
Ομοίως, μπορεί να αναρωτηθεί κανείς, ποιος είναι ο ρόλος των περιοριστικών ενζύμων;
ΕΝΑ περιοριστικό ένζυμο είναι μια πρωτεΐνη που αναγνωρίζει μια συγκεκριμένη, σύντομη αλληλουχία νουκλεοτιδίων και κόβει το DNA μόνο σε αυτό το συγκεκριμένο σημείο, το οποίο είναι γνωστό ως περιορισμός τοποθεσία ή αλληλουχία στόχου. Σε ζωντανά βακτήρια, λειτουργούν περιοριστικά ένζυμα για να υπερασπιστεί το κύτταρο από εισβολείς ιικούς βακτηριοφάγους.
Επίσης, πώς ξέρετε ποιο ένζυμο περιορισμού να χρησιμοποιήσετε; Όταν επιλέγετε ένζυμα περιορισμού, θέλετε να επιλέξετε ένζυμα που:
- Πλευρώστε το ένθετό σας, αλλά μην κόψετε μέσα στο ένθεμά σας.
- Βρίσκεστε στην επιθυμητή θέση στο πλασμίδιο παραλήπτη σας (συνήθως στην τοποθεσία πολλαπλής κλωνοποίησης (MCS)), αλλά μην κόβετε αλλού στο πλασμίδιο.
Εκτός από αυτό, πώς χρησιμοποιούνται τα περιοριστικά ένζυμα στην έρευνα;
Στο εργαστήριο, περιοριστικά ένζυμα (ή περιοριστικές ενδονουκλεάσες ) είναι μεταχειρισμένος να κόψει το DNA σε μικρότερα κομμάτια. Οι τομές γίνονται πάντα σε συγκεκριμένες αλληλουχίες νουκλεοτιδίων. Διαφορετικός περιοριστικά ένζυμα αναγνωρίζουν και κόβουν διαφορετικές αλληλουχίες DNA.
Ποιος είναι ο ρόλος της ηλεκτροφόρησης γέλης;
Ηλεκτροφόρηση γέλης είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό θραυσμάτων DNA ανάλογα με το μέγεθός τους. Τα δείγματα DNA φορτώνονται σε φρεάτια (εσοχές) στο ένα άκρο του α γέλη , και εφαρμόζεται ηλεκτρικό ρεύμα για να τα τραβήξει μέσα από το γέλη . Τα θραύσματα DNA είναι αρνητικά φορτισμένα, επομένως κινούνται προς το θετικό ηλεκτρόδιο.
Συνιστάται:
Κατά την εκτέλεση μιας μπλε λευκής οθόνης περιέχουν λευκές αποικίες βακτηρίων;
Αντίθετα, οι λευκές αποικίες δεν μπορούν να μεταβολίσουν το X-Gal για να παράγουν το μπλε χρώμα, επειδή δεν παράγουν λειτουργική β-γαλακτοσιδάση μετά την πρόσληψη πλασμιδίου που φέρει το εισαγόμενο DNA και διαταράσσει το γονίδιο lacZ α. Αυτές οι λευκές αποικίες περιέχουν τα ανασυνδυασμένα βακτήρια και θα πρέπει να επιλεγούν (Εικόνα 1)
Σε τι χρησιμεύουν τα περιοριστικά ένζυμα στη φύση;
Ένζυμο περιορισμού, που ονομάζεται επίσης περιοριστική ενδονουκλεάση, μια πρωτεΐνη που παράγεται από βακτήρια που διασπά το DNA σε συγκεκριμένες θέσεις κατά μήκος του μορίου. Στο βακτηριακό κύτταρο, τα περιοριστικά ένζυμα διασπούν το ξένο DNA, εξαλείφοντας έτσι τους μολυσματικούς οργανισμούς
Πώς τα περιοριστικά ένζυμα χειραγωγούν το DNA;
Ένα βακτήριο χρησιμοποιεί ένα ένζυμο περιορισμού για να αμυνθεί από βακτηριακούς ιούς που ονομάζονται βακτηριοφάγοι ή φάγοι. Όταν ένας φάγος μολύνει ένα βακτήριο, εισάγει το DNA του στο βακτηριακό κύτταρο έτσι ώστε να μπορεί να αντιγραφεί. Το ένζυμο περιορισμού εμποδίζει την αντιγραφή του DNA του φάγου κόβοντάς το σε πολλά κομμάτια
Μπορούν τα περιοριστικά ένζυμα να κόψουν το RNA;
Τα περιοριστικά ένζυμα είναι νουκλεάσες - ένζυμα που κόβουν πολυμερή νουκλεϊκών οξέων (δηλαδή DNA και RNA). Η ικανότητα αυτών των ενζύμων να κόβουν το DNA σε συγκεκριμένες θέσεις παρέχει στα βακτήρια έναν τύπο ανοσοποιητικού συστήματος που κόβει και, επομένως, απενεργοποιεί το ξένο DNA, όπως αυτό που εισάγεται από ιούς
Πώς χρησιμοποιούνται τα περιοριστικά ένζυμα και η λιγάση στη βιοτεχνολογία;
Τα περιοριστικά ένζυμα είναι ένζυμα κοπής DNA. Η DNA λιγάση είναι ένα ένζυμο που ενώνει το DNA. Εάν δύο κομμάτια DNA έχουν ταιριαστά άκρα, η λιγάση μπορεί να τα συνδέσει για να σχηματίσουν ένα ενιαίο, αδιάσπαστο μόριο DNA. Στην κλωνοποίηση DNA, τα περιοριστικά ένζυμα και η λιγάση DNA χρησιμοποιούνται για την εισαγωγή γονιδίων και άλλων τεμαχίων DNA σε πλασμίδια