Πώς λειτουργεί η κλωνοποίηση Gibson;
Πώς λειτουργεί η κλωνοποίηση Gibson;

Βίντεο: Πώς λειτουργεί η κλωνοποίηση Gibson;

Βίντεο: Πώς λειτουργεί η κλωνοποίηση Gibson;
Βίντεο: ΠΩΣ ΛΕΙΤΟΥΡΓΕΙ Η ΒΑΣΙΛΕΙΑ ΤΟΥ ΘΕΟΥ ΣΤΗ ΖΩΗ ΜΑΣ - Μιχαλάκης Πουλλαίδης 2024, Νοέμβριος
Anonim

ο Κλωνοποίηση Gibson Το Master Mix αποτελείται από τρία διαφορετικά ένζυμα σε ένα μόνο ρυθμιστικό διάλυμα. Κάθε ένζυμο έχει μια συγκεκριμένη και μοναδική λειτουργία για την αντίδραση: Εξωνουκλεάση T5 - δημιουργεί μονόκλωνους προεξοχές DNA 3' μασώντας πίσω από το άκρο 5' του DNA. Τα συμπληρωματικά θραύσματα DNA μπορούν στη συνέχεια να συγκολληθούν μεταξύ τους.

Λαμβάνοντας υπόψη αυτό, πώς λειτουργεί ο Gibson;

ο Γκίμπσον Η μέθοδος Assembly® είναι μια διαδικασία κλωνοποίησης που επιτρέπει την κλωνοποίηση δύο ή περισσότερων θραυσμάτων χωρίς την ανάγκη πέψης με ένζυμα περιορισμού ή συμβατών θέσεων περιορισμού. Αντίθετα, τα επικαλυπτόμενα άκρα που ορίζονται από τον χρήστη ενσωματώνονται στα θραύσματα για να επιτρέπεται η απρόσκοπτη ένωση γειτονικών θραυσμάτων.

Ομοίως, τι υπάρχει στο Gibson Assembly Master Mix; ο Gibson Cloning Master Mix αποτελείται από τρία διαφορετικά ένζυμα μέσα σε ένα μόνο ρυθμιστικό διάλυμα. Κάθε ένζυμο έχει μια συγκεκριμένη και μοναδική λειτουργία για την αντίδραση: Εξωνουκλεάση Τ5 - δημιουργεί μονόκλωνους προεξοχές DNA 3' μασώντας πίσω από το άκρο 5' του DNA. Τα συμπληρωματικά θραύσματα DNA μπορούν στη συνέχεια να συγκολληθούν μεταξύ τους.

Με αυτόν τον τρόπο, πώς λειτουργεί η συναρμολόγηση του Golden Gate;

Χρυσή Πύλη κλωνοποίηση ή Συναρμολόγηση Golden Gate είναι μια μέθοδος μοριακής κλωνοποίησης που επιτρέπει σε έναν ερευνητή να συναρμολογήσει ταυτόχρονα και κατευθυντικά πολλαπλά θραύσματα DNA σε ένα ενιαίο κομμάτι χρησιμοποιώντας ένζυμα περιορισμού τύπου IIs και λιγάση DNA Τ4. Αυτό συναρμολόγηση είναι πραγματοποιούνται in vitro.

Πώς λειτουργεί η κλωνοποίηση Gateway;

ο GATEWAY Κλωνοποίηση Η τεχνολογία βασίζεται στο σύστημα ανασυνδυασμού ειδικής θέσης που χρησιμοποιείται από τον φάγο Ι για να ενσωματώσει το DNA του στο Ε. Οι θέσεις attL και attR που περιβάλλουν το εισαγόμενο DNA φάγου ανασυνδυάζονται ειδικά για τη θέση κατά τη διάρκεια του συμβάντος εκτομής για να αναμορφώσουν τη θέση attP στον φάγο 1 και το τοποθεσία attB στο Ε.

Συνιστάται: