Πώς εισάγετε ένα γονίδιο σε ένα πλασμίδιο;

2024 Συγγραφέας: Stanley Ellington | [email protected]. Τελευταία τροποποίηση: 2024-01-18 08:16

Τα βασικά βήματα είναι:

1. Κόψτε ανοίξτε το πλασμίδιο και «πάστα» στο γονίδιο . Αυτή η διαδικασία βασίζεται σε ένζυμα περιορισμού (που κόβουν το DNA) και DNA λιγάση (που ενώνει το DNA).
2. Εισάγετε ο πλασμίδιο σε βακτήρια.
3. Μεγάλωσε πολλά πλασμίδιο -μεταφέροντας βακτήρια και χρησιμοποιήστε τα ως «εργοστάσια» για την παραγωγή της πρωτεΐνης.

Επίσης, πώς μπορεί να εισαχθεί ένα γονίδιο σε ένα πλασμίδιο GCSE;

είναι εισάγεται σε ένα πλασμίδιο χρησιμοποιώντας ένζυμα λιγάσης. ο πλασμίδιο πηγαίνει σε ένα βακτηριακό κύτταρο. το διαγονιδιακό βακτήριο αναπαράγεται, με αποτέλεσμα σε εκατομμύρια πανομοιότυπα βακτήρια που παράγουν ανθρώπινη ινσουλίνη.

Επιπλέον, πώς μπορείτε να υποκλωνοποιήσετε ένα γονίδιο; Βασικά βήματα για Υποκλωνοποίηση Απελευθερώνετε και καθαρίζετε το ένθετό σας από τον μητρικό φορέα, απολινώνετε αυτό το ένθετο σε έναν προετοιμασμένο φορέα προορισμού, μετατρέπετε αυτήν την αντίδραση απολίνωσης σε ικανά βακτηριακά κύτταρα. Στη συνέχεια εξετάζετε τα μετασχηματισμένα κελιά για το ένθετο.

Έχοντας αυτό υπόψη, ποια είναι τα 4 βήματα της κλωνοποίησης γονιδίων;

Στα κλασικά πρωτόκολλα κλωνοποίησης πέψης και απολίνωσης με περιοριστικά ένζυμα, η κλωνοποίηση οποιουδήποτε θραύσματος DNA περιλαμβάνει ουσιαστικά τέσσερα στάδια:

• απομόνωση του DNA που μας ενδιαφέρει (ή του DNA στόχου),
• απολίνωση,
• διαμόλυνση (ή μεταμόρφωση) και.
• διαδικασία διαλογής/επιλογής.

Πώς ενισχύετε ένα πλασμίδιο;

Πειραματική διαδικασία

1. Εκτελέστε PCR και καθαρίστε το προϊόν PCR: Εκτελέστε PCR για να ενισχύσετε το ένθετο DNA σας.
2. Χώνεψε το DNA σου:
3. Απομονώστε το ένθετο και το φορέα σας με καθαρισμό γέλης:
4. Συνδέστε το ένθετό σας στο διάνυσμά σας:
5. Μεταμόρφωση:
6. Απομονώστε το τελικό πλασμίδιο:
7. Επαληθεύστε το πλασμίδιο σας με αλληλούχιση: